免疫印跡意思

免疫印跡（Western blot）是一種實驗技術，用於檢測生物樣品中特定蛋白質的存在。這個過程結合了SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳（SDS-PAGE）的高分離效率和抗體的高特異性識別能力。以下是免疫印跡的基本步驟：

樣品處理：將生物樣品（如細胞裂解液、組織提取物或體液）進行處理，以釋放其中的蛋白質。樣品通常會經過變性處理，以便蛋白質能夠在凝膠中單獨分離。
SDS-PAGE電泳：將樣品加載到含有SDS的聚丙烯醯胺凝膠中，通過電泳根據蛋白質分子量的大小將蛋白質分離。較小的蛋白質在凝膠中移動較快，因此可以根據其分子量進行分離。
轉印（轉膜）：將SDS-PAGE凝膠中的蛋白質轉移到一種支持膜上，如硝酸纖維素膜或PVDF膜。這個步驟通常使用電轉印法，將蛋白質從凝膠轉移到膜上。
阻斷：為了減少非特異性結合，膜需要在檢測前用含有蛋白質的溶液（如5%的脫脂奶粉或BSA）進行阻斷。
孵育一抗：將特異性的一抗（primary antibody，針對目標蛋白質的抗體）加到膜上，讓其與轉印上去的蛋白質結合。
洗滌：洗去未結合的一抗，以減少背景信號。
孵育二抗：將與一抗標記的二抗（secondary antibody，通常與酶或同位素標記）加到膜上，讓其與結合在膜上的第一抗體結合。
洗滌：再次洗去未結合的第二抗體。
檢測：根據二抗的標記類型，可以使用化學發光、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、放射性同位素或其他方法來檢測結合在膜上的二抗，從而確定目標蛋白質的存在和含量。

免疫印跡技術被廣泛用於生物醫學研究、診斷和藥物開發中，用於確定樣品中特定蛋白質的表達水平、純度檢測以及蛋白質分子的相互作用分析。